TINCION GRAM
La tinción Gram es una técnica fundamental en microbiología, que caracteriza bacterias en función su pared celular. Utilizada en la identificación primaria de aislados ambientales, el diseño de baterías de antibióticos o en el seguimiento de pureza en cultivos establecidos.
A grandes rasgos, se usa el tinte «cristal violeta» que colorea a todas las células en una muestra, después, se utiliza un decolorante como alcohol-acetona y una contratinción roja «safranina». A las bacterias que retienen el tinte violeta se les llama gram-positivas. A las bacterias que no retienen tinte violeta se les llama gram-negativas y pueden visualizarse mediante la contratinción roja.
El color de las células teñidas se observa utilizando un microscopio óptico.
FUNDAMENTO
La diferencias observadas en las propiedades de tinción se deben a las diferencias estructurales de pared celular.
En Gram-positivas la conformación de pared celular consta de una capa gruesa de peptidoglicano (o mucopéptido, matriz de proteínas glicosiladas negativamente cargadas) que cubre de manera rígida a la suave membrana celular. Esta estructura bioquímicamente densa tiene afinidad de cargas con el tinte ocasionando la retención de cristal violeta. Además, el lugol precipita al tinte dentro de las células lo que dificulta aún más su lavado. Así, las gram-positivas obtienen un característico color azul-púrpura.
En Gram-negativas, la pared celular se conforma una capa delgada de peptidoglicano intermedia a dos membranas citoplasmáticas suaves. Con una densidad molecular relativamente baja, la capa rígida de peptidoglicano no puede retener la tinción violeta. En este microambiente, el agente decolorante se disuelve. La observación se realiza mediante tintes de contraste, como la safranina. Presentando células color rojo.
Notas adicionales:
En realidad la diferencia de color no es específica de la pared bacteriana: todas las células sin pared, como las animales, pierden fácilmente el cristal violeta. Todas las células con pared gruesa, como las de hongos, se verán de color violeta. La correlación entre el color y el tipo de pared solo tiene sentido con células bacterianas (salvo excepciones) [Iáñez, s-f-].
PROTOCOLO
- Preparar y fijar un frotis: Colocar una gota de agua estéril sobre el portaobjetos. Con asa de nicromo tomar una masa de células y frotar sobre la gota de agua homogéneamente. El técnico puede esperar a que la muestra se deshidrate a temperatura ambiente (poco práctico) o puede fijar con calor. La fijación de la muestra se realiza mediante calor suave sobre la flama de un mechero, es importante evitar el calor excesivo ya que puede destruir la morfología bacteriana.
- Teñir con una gota de Violeta de Genciana durante un minuto.
- Lavar el frotis con solución de Yodo Gram.
- Utilizar esta misma solución de Yodo Gram como mordiente durante un minuto más.
- Lavar con solución Alcohol Acetona hasta que ya no escurra líquido azul.
- Teñir con una gota de Safranina durante un minuto.
- Lavar repetidamente con agua destilada.
- Secar exceso y visualizar en el microscopio óptico a 1000X.
LECTURA
A) Escherichia coli, coloración roja reacción gram-negativa (Izq.)
B) Bacillus thuringiensis, coloración violeta reacción gram-positiva (Der.)
REFERENCIAS DE CONSULTA
- Métodos de Laboratorio de Lynch, Raphael, Mellor, Spare & Inwood. 2da Ed. Editorial Interamericana.
- Staining Procedures, Clarck, G. De William & Wilkins. 4ta Ed.
- Fundamentals of Clinical Chemistry, Norbert W.
- Iáñez, E. (s.f.) Métodos tinciones. Universidad de Granada. Recuperado [20-septiembre-2023], de: https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm
¿Cómo citar este artículo web?
Zarate-Rivera, A. K. (2023). Tinción de Gram. Recuperado [día-mes-año], de Algae Bank Revista website: https://algaebank.com.mx/tincion-gram
